非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？ 作者: 墨池 (站内联系TA) 收录: 2011-07-31 发布: 2011-07-21
1 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？ 2 SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？ 谢谢(*^__^*) 嘻嘻 | ||
holyala (站内联系TA) 1. 变性胶加尿素或者其他变性剂，非变性胶是不加的。一般做RNA分离或回收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。 2. SRAP（貌似叫什么...相关序列扩增多态性）标记这个应该是非变性PAGE，6%的PAGE胶配方就不用发了吧，google一下一大堆。TEMED和过硫酸铵都是最后加，混匀后再灌胶。 墨池 (站内联系TA) Originally posted by holyala at 2011-07-21 2121: 1. 变性胶加尿素或者其他变性剂，非变性胶是不加的。一般做RNA分离或回收、蛋白质分子量测定会使用变性PAGE，而DNA跑PAGE通常是采用非变性PAGE，另外回收活性蛋白也有用非变性PAGE的。 2. SRAP（貌似叫什么...相 ... TEMED和过硫酸铵的先后呢？ todouhy (站内联系TA) Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2138: TEMED和过硫酸铵的先后呢？ 最后加APS,也就是过硫酸铵，变性就是用缓冲液中加了SDS changes (站内联系TA) Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2019: 1 非变性和变性聚丙烯酰胺凝胶的区别？“变性”体现在哪里？ 2 SRAP标记用6%聚丙烯酰胺凝胶电泳，是变性还是非变性？配方是什么？配胶时，过硫酸铵是不是要最后加入？ 谢谢(*^__^*) 嘻嘻 1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。 2.SRAP一般用变性的聚丙烯酰胺，毕竟片段还是比较小。 3.配胶时不用加入过硫酸铵，灌胶前同时加入过硫酸铵(注意有毒！低温保存)和TEMED（也有毒，特臭）。 另外，这些问题貌似分子克隆那本书非常详细，只不过SRAP标记较新而已，没有收录，但是检测方法是通用的。请多多看书，祝实验好运！ 墨池 (站内联系TA) Originally posted by changes at 2011-07-21 2107: 1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。 2.SRAP一般 ... 你说SRAP是变性的，我看师姐的配胶过程没有一点体现变性的物质。 changes (站内联系TA) Originally posted by 墨池 at 2011-07-21 2104: 你说SRAP是变性的，我看师姐的配胶过程没有一点体现变性的物质。 非变性胶也可以，但是分辨率会低些。另外，你是用SRAP标记做什么的，多态性还是标记目的基因或遗传图谱构建？ 冼亮淀粉酶 (站内联系TA) APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。 holyala (站内联系TA) Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-07-22 0727: APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。 ...额~~话说我们一般都是把丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺配成40%的母液，用的时候根据所需要的浓度加一定量的母液即可。要是每次都搞丙烯酰胺来配，那谁受得了啊。。。 holyala (站内联系TA) Originally posted by changes at 2011-07-21 2107: 1. “变性”体现在聚丙烯酰胺凝胶中加入尿素(一般跑DNA)或SDS(一般跑蛋白)，另外，如果样品也要变性(DNA的loanding buffer也与普通的琼脂糖电泳所用的不同，同理所用Marker也不同；蛋白也要变性)。 2.SRAP一般 ... 这个我有点问题...跑DNA的PAGE电泳要用变性胶么？根据我的经验，双链DNA跑尿素PAGE的时候由于变性导致双链打开，电泳图会非常难看，原本的单一条带会变成非常接近的两个条带。嗯，不过我这种情况是DNA片段较大（＞50bp）的时候，不知道十几个bp的DNA会怎样。so...我只用过尿素PAGE分离回收RNA的说... 空谷幽风 (站内联系TA) 变性聚丙烯酰胺电泳buffer里面含尿素等变性剂 pcr产物dna双链会解离成为单链 非变性电泳不会解链 dna以双链形式电泳 墨池 (站内联系TA) Originally posted by changes at 2011-07-21 2202: 非变性胶也可以，但是分辨率会低些。另外，你是用SRAP标记做什么的，多态性还是标记目的基因或遗传图谱构建？ 多态性。一种观赏花卉50个品种的遗传多样性分析 墨池 (站内联系TA) Originally posted by holyala at 2011-07-22 1055: ...额~~话说我们一般都是把丙烯酰胺和甲叉丙烯酰胺配成40%的母液，用的时候根据所需要的浓度加一定量的母液即可。要是每次都搞丙烯酰胺来配，那谁受得了啊。。。 你理解有误，我们说的就是指母液，不知道你怎么理解成这样了 holyala (站内联系TA) Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 1320: 你理解有误，我们说的就是指母液，不知道你怎么理解成这样了 不知道是哪里的问题啊...如果我理解不对的话，那么冼亮淀粉酶大大说的：“APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。” 意思难道是所有东西都加好，最后再取母液吗？？这种配胶的顺序到是蛮新奇的... changes (站内联系TA) Originally posted by 墨池 at 2011-07-22 1313: 多态性。一种观赏花卉50个品种的遗传多样性分析 多态性的话建议使用变性胶检测，使用大板、长板，那样跑出来相当漂亮，也方便统计条带。 另外，材料的亲缘关系最好也明确，对于最终结果的分析有帮助。 :P 墨池 (站内联系TA) Originally posted by holyala at 2011-07-22 1454: 不知道是哪里的问题啊...如果我理解不对的话，那么冼亮淀粉酶大大说的：“APS和TEMED虽然不好，但也比不上丙烯酰胺有神经毒性，可随皮肤渗入人体，所以我是什么东西都加完之后最后加丙烯酰胺。” 意思难道是所 ... 他是简略回答好不好，就是指母液啦 墨池 (站内联系TA) Originally posted by changes at 2011-07-22 1422: 多态性的话建议使用变性胶检测，使用大板、长板，那样跑出来相当漂亮，也方便统计条带。 另外，材料的亲缘关系最好也明确，对于最终结果的分析有帮助。 :P 变性胶的配方有么？可否参考一下下(*^__^*) 嘻嘻…… |
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变性,使用,双链,多态性,尿素,母液
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