乙酰水杨酸对醋酸扭痛模型的镇痛效果和福尔马林实验模拟慢性疼痛（小鼠）
实验目的
1． 小鼠醋酸扭体模型的药物镇痛效力；
2． 福尔马林模拟临床慢性模型的构造。
实验原理
1. 扭痛模型：各种伤害，如醋酸引起的疼痛刺激通过感觉神经纤维传送到脊髓，然后到达大脑皮质产生疼痛感觉。中央和外周镇痛剂舒缓疼痛通过感觉中枢的一体化和抑制或减少疼痛感觉的进入。中枢的止痛很容易通过动物实验证实效果，但一些周边止痛药，如水杨酸的影响不容易确定。
2. 福尔马林实验：甲醛实验能较好的模拟临床慢性疼痛，是一种重要的慢性疼痛模型。文献报道小鼠甲醛实验可分为两个时相，分别是注射甲醛后0-5min内和20-30min，这两个时相引起的疼痛机制不同。第1时相，是刺激伤害性感受器引起的直接效应，能被中枢性镇痛药如
吗啡抑制。第2时相，是由前列腺素部分介导的炎症反应，能被非类固醇类抗炎剂、类固醇和中枢性镇痛药抑制。
试剂和仪器
1. 仪器：注射器，注射针头，灌胃针，电子天平，计数器，鼠箱，小鼠解剖基本器材。
2. 试剂：乙酰水杨酸样品（由学生实验制得），乙酰水杨酸标准品（山东鲁抗制药Serial No.1002282013），1.1%醋酸，福尔马林（北京CMF生产），生理盐水。
3. 动物：18-22g小鼠18只（在实验室养3天并在试验前12小时不喂食）。
实验过程
乙酰水杨酸对醋酸扭痛模型的镇痛效果：
1. 取9只小鼠，随机分成3组，每组3只，所有的小鼠用记号笔编号标记(1、2、3为阴性对照组，4、5、6为阳性对照组，7、8、9为测试组)。
2. 向测试组的三只小鼠中，按照1mg/10g比例注射乙酰水杨酸，阳性对照组的小鼠中，按照0.15mg/10g的比例注射，阴性对照组，按照0.2mg/10g的比例注射生理盐水。
3. 上步反应30Min后，向每只小鼠通过腹腔注射1.1%的醋酸，每只0.2ml。
4. 用计数器记下每只小鼠在10min的扭体次数。
5．疼痛抑制百分率用下述公式计算：抑制百分率=（阴性对照组平均扭体数-测试（阳性）组平均扭体数）/阴性对照组平均扭体数*100%
福尔马林实验模拟慢性疼痛：
1. 福尔马林测试：参照醋酸扭体实验步骤(1)和(2)给药，给药后30分钟，自小鼠右后爪足背皮下注射1% 福尔马林 0.2ml。
2. 将小鼠舔、咬右爪的时间长度作为疼痛反应的指示。记录注射福尔马林后0 ~ 5min(第1时相)和15~ 30min(第2时相)反应时间。
3. 注射福尔马林1h后, 将小鼠断头处死, 自膝关节切脚,称重, 比较左右足重量差异。
实验结果：
乙酰水杨酸对醋酸扭痛模型的镇痛效果：
组别
编号
扭体次数（次）
平均（次）
阴性对照组（生理盐水）
1
35
32.5
2
死亡
3
市场价格在有些情况下（如对市场物品）可以近似地衡量物品的价值，但不能准确度量一个物品的价值。三者的关系为：30
阳性对照组（标准品）
4
（四）规划环境影响评价的审查死亡
（2）规划编制机关在报送审批专项规划草案时，将环境影响报告书一并附送。33.5
5
专项规划    工业、农业、畜牧业、林业、能源、水利、交通、城市建设、旅游、自然资源开发有关的专项规划。    环境影响报告书27
6
2.环境保护行政法规40
测试组（样品）
7
不敏感
25.5
8
24
9
27
结果如上表所示，实验中2、4号鼠分别于腹腔注射1.1%醋酸后5分钟内死亡，注射时未发
现血液、尿液、内容物回流至注射器，尸体解剖结果显示肝、肾部位完好，具体死亡原因待进一步验证。7号鼠注入醋酸后无明显反应，实验后处死，尸体解剖结果未见异常。
由实验结果看出，自制阿司匹林获得良好的镇痛效果，其镇痛率为 21.54%，而市售阿司匹林标准品未获得明显结果，可能由于样本量过少而个体差异较大导致，同时表明实验组结果未必精确。同时，由于样本量过少，本结果仅可用于定性，无法进行进一步的统计学验证。进一步分析需通过更大样本量进行验证。
福尔马林实验模拟慢性疼痛：
组别
编号
舔咬右后爪次数（次）
右后爪重量（g）
左后爪重量（g）
左右重量差（g）
平均（g）
0-5min
15-30min
阴性对照组
1
9
1
0.5013
0.6473
0.146
0.2323
2
3
1
0.586
0.7783
0.1923
3
13
0
0.6119
0.9705
0.3586
阳性对照组
4
15
0
0.4519
0.5526
0.1007
0.178967
5
18
0
0.6476
0.7537
0.1061
6
4
0
0.4621
0.7922
0.3301
测试组
7
8
0
0.4887
0.5856
0.0969
0.108533
8
5
2
0.5956
0.6701
0.0745
9
18
0
0.4746
0.6288
0.1542
结果如上表所示：由于计时器本身的原因，未能准确记录小鼠持续啃咬右后爪时间，但可观察到注射福尔马林后一时相中0-2min小鼠多次啃咬右后爪而3-5min啃咬极少，二时相15-30min极少有啃咬右后爪的现象。 而对小鼠左右后爪对比称重的结果显示，阳性对照组（标准品）和测试组组（自制品）左右足重量差异均有明显减小，均体现出明显的消肿抗炎作用，而自制品的抗炎作用与标品相比更佳。
与扭体实验的结果综合比较，可认为自制阿司匹林有显著的镇痛抗炎效果可能大于除去包衣后的市售普通阿司匹林肠溶片。 同时，由于本实验样本量过少，本实验的所有结果仅可用于定性，无法进行进一步的计学验证如t检验等。进一步分析需通过更大样本量的实验进行验证。
实验讨论：
小鼠扭体疼痛模型:
小鼠扭体法是筛选镇痛药的常用方法之一，应用一些化学刺激（例如醋酸）注入小鼠腹腔内，引起深的、大面积而持久的疼痛刺激，指示小鼠产生“扭体“反应，腹部内凹、躯干与
后腿伸张、臀部高起。观察给予醋酸10分钟内发生”扭体“反应的小白鼠数或各小鼠发生”扭体“次数，是一种敏感、简便、重复性好的方法。研究表明，醋酸浓度为1.1%时小鼠扭体最为明显。
乙酰水杨酸作用机理：
乙酰水杨酸俗名阿司匹林，是一种解热镇痛药。其主要作用有：
① 镇痛作用：主要是通过抑制前列腺素及其他能使痛觉对机械性或化学性刺激敏感的物质（如缓激肽、组胺）的合成，属于外周性镇痛药。但不能排除中枢镇痛（可能作用于下视丘）的可能性；
  ② 消炎作用；确切的机制尚不清楚，可能由于本品作用于炎症组织，通过抑制前列腺素或其他能引起炎性反应的物质（如组胺）的合成而起消炎作用，抑制溶酶体酶的释放及白细胞活力等也可能与其有关；
  ③ 解热作用：可能通过作用于下视丘体温调节中枢引起外周血管扩张，皮肤血流增加、出汗、使散热增加而起解热作用，此种中枢性作用可能与前列腺素在下视丘的合成受到抑
制有关；
  ④ 抗风湿作用：本品抗风湿的机制，除解热、镇痛作用外，主要在于消炎作用；
⑤ 对血小板聚集的抑制作用：是通过抑制血小板的前列腺素环氧酶( prostaglandin cyclooxygenase)、从而防止血栓烷A2(thromboxane A2TXA2)的生成而起作用（TXA2可促使血小板聚集)。此作用为不可逆性。
本实验中, 自制阿司匹林按10mg/kg给药能显著减少小鼠的扭体次数，并且达到20%以上的镇痛率。上述结果提示，本实验用自制阿司匹林对炎症性疼痛具有一定的镇痛作用。
福尔马林玲疼痛实验：
福尔马林实验室目前疼痛基础研究中较常用的疼痛模型。为了在行为测试中提高特异性，福尔马林的最佳注射部位是小鼠（或大鼠）后脚掌的皮下，因为正常情况下小鼠很少舔舐后脚掌。注射福尔马林后动物可以出现两期伤害性行为变化，分别涉及两种不同的致痛机理。前期变化从注射后即开始，持续0~5分钟，此期可能和化学性刺激直接作用于伤害性受体，主要与兴奋C类伤害性纤维有关，次即为Ⅰ相痛，也称为快痛；大约在注射福尔马林
后15~30分钟又开始出现持续疼痛反应，此期反应的早期由P物质和缓激肽参与，后期有组织胺，5-羟色胺，前列腺素和缓激肽等参与，此即为Ⅱ相痛，炎性疼痛，也称为慢痛。福尔马林实验的疼痛反应可用舔舐注射福尔马林脚掌的时间来作为评价的疼痛指标。福尔马林引发水肿的切脚实验结果表明, 与生理盐水组相比, 样品阿司匹林在镇痛剂量时能抑制皮下注射福尔马林引起的水肿，提示自制阿司匹林可以有效抑制炎症反应。
参考文献：
(1)刘和莉, 李月玲, 薛永志,  不同温度和醋酸浓度对小鼠扭体疼痛模型的影响， 包头医学院学报，2006.2
(2)刘渝, 俞岚, 张兵,原花青素对醋酸所致小鼠疼痛模型的影响,  医药导报，2007.11
(3)胡然,贾永蕊,朱素君,库宝善,张永鹤,  氯丙米嗪镇痛抗炎作用研究,  中国疼痛医学杂志, 2004, 10, (2)
(4) Jan HR, Steinar H, Kjell H. Modification of the antinociceptive effect of morphine by acute and chronic administration of clomipramine in mice. Pain, 1988.33, 349-355.
(5) Steinar H, Kjell H. The formalin test in mice: dissociation between inflammatory and non inflammatory pain. Pain, 1987, 30 103-114.

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