3.2  发酵液中氮含量测定（甲醛法）
3.2.1  原理：
    利用甲醛法测定，测定结果是发酵液中氨基氮和氨氮量的总和。氨氮：一分子铵盐与甲醛作用，生成环六次甲基四胺及二分子无机酸，后者以标准碱滴定，以此算出氨氮的含量。氨基氮：氨基酸之氨基与甲醛结合后，使氨基酸之碱性消失，再用标准碱液来滴定羧基，算出氨氮的含量。化学反应及副反应式如下：
    2(NH4)2SO4  +  6HCHO            (CH2)N4  +  2H2SO4  +  6H2O
    H2SO4  +  2NaOH              Na2SO4  +  2H2O
    R-CHNH2CHOOH  +  HCHO              RCN-N=CH2CHOOH  +  H2O
        N=CH2                            N=CH2
                                       
R  C    H  +  NaOH            R  C    H  +  H2O
                                     
        COOH                            COOH
3.2.2  仪器和设备
    25ml滴定管、5ml吸量管、1000ml容量瓶、250ml三角瓶、100ml量筒。
3.2.3  试剂和溶液
3.2.3.1  0.03569mol/L氢氧化钠标准溶液：取0.3569mol/L NaOH标准液100ml于1000ml容量瓶中，加纯化水稀释至刻度摇匀即可。
3.2.3.2中性甲醛：40%甲醛加二倍水稀释，临用前0.03569mol/L NaOH调至微红色，用酚酞作指示剂。
3.2.3.3  0.5%酚酞指示剂：称2.5g酚酞溶于500ml 95%乙醇中，摇匀即可。3.2.3.4  0.1%甲基红指示剂：称0.1g甲基红溶于100ml 95%乙醇中，摇匀即可。
3.2.4  操作步骤：
吸取发酵液滤液(或离心上清液)2.5ml于250ml三角瓶中，加纯化水约50ml，加0.1%甲基红指示剂2-3滴，加1mol/L盐酸1-2滴。使其成红色，放置3分钟，然后再以0.03569mol/L的NaOH标准溶液调至橙黄色，加入中性甲醛5-10ml，放置10分钟，再加0.5%酚酞指示剂3-5滴。用0.03569mol/L 的NaOH标准溶液滴定至微红色半分钟不褪色为终点。
                              M NaOH ×V NaOH ×0.01401×1000
    计算公式：氨氮（mg/100ml）=                                ×100%
                                            2.5ml
3.2.5  注意事项：
3.2.5.1  加入甲醛前，酸碱要调节好，严格控制终点变化，特别是消后培养基中的碳酸钙要消耗部分盐酸，故需放置3分钟为好。
3.2.5.2  甲醛有微酸性，要中和后才能用。
3.2.5.3  所测得结果为氨氮和氨基氮总和。

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