微波炉加热法用于培养基熔化的效果评价

程长宝

【摘要】细菌培养基在使用过程中,经常需要将其熔化使用,在熔化过程中,一般多采用电炉加热的方法。而这种传统方法的使用存在一些问题,一是需要人员值守,电炉功率不能精确控制,加热惯性比较大,培养基容易溢出。二是一旦溢出后,由于电炉丝直接暴露在外,溢出液体容易引起电炉短路。三是电炉加热培养基时由于底部温度高,容易引起培养基焦糊。而用微波炉熔化培养基可以避免这些问题,且快捷、安全,定时后无需人员看守,特别适用于培养基熔化。以下就微波炉熔化培养基的方法与传统电炉熔化法进行比对,以便确认微波炉熔化法的使用效果。

【期刊名称】《临床检验杂志(电子版)》

【年(卷),期】2019(008)001

【总页数】2页(P101-102)

【关键词】微波炉加热法;基熔化;效果评价

【作者】程长宝

【作者单位】天长市疾病预防控制中心,安徽天长239300;

【正文语种】中文

【中图分类】R282.4

1 材料与方法

1.1 培养基营养肉汤、营养琼脂、HE琼脂、CN琼脂、B-P琼脂、MYP琼脂分别购自北京陆桥生物技术公司及青岛海博生物有限公司。

1.2 标准菌株此次试验使用了大肠埃希氏菌（ATCC43888）、沙门氏菌（CMCC(B)50761）、铜绿假单胞菌（CMCC(B)10104）、金黄色葡萄球菌（ATCC29213）、蜡样芽孢杆菌（CMCC(B)63303），这些标准储存菌株来自北京中科质检生物有限公司及滁州市疾控中心微生物检验科。

1.3 实验设备电热恒温培养箱生产厂家为上海三发科学仪器有限公司，在检定有效期内，

检定单位为滁州市计量所。电炉（电子万用炉，1,000 w）为南通市长江光学有限公司生产。微波炉生产厂家为顺德市格兰仕微波炉电器有限公司。

1.4 实验方法

1.4.1 培养基配制营养琼脂、HE琼脂、CN琼脂、B-P琼脂、MYP琼脂培养基均按照生产商使用说明配制，分装于三角烧瓶中。其中营养琼脂、CN琼脂、B-P琼脂基础、MYP琼脂基础这4种培养基置121 oC高压灭菌，HE琼脂临用前配制，冷却后置冰箱备用[1]。所有培养基均配制两份，分为A组和B组。其中A组用电炉熔化，B组用微波炉熔化。

1.4.2 菌株复苏及菌液制备将各标准菌株置于营养肉汤中复苏，36 oC培养24 h，随后接种营养琼脂，36 oC培养24 h。取营养琼脂上的新鲜菌落加入灭菌生理盐水管，调整菌液浓度为1个麦氏单位，作为菌株样品原液。并分别做1:10倍比稀释，稀释至10-7浓度。

1.4.3 菌株接种及培养选取10-3-10-7浓度标准菌株样液0.1 mL×2加入无菌平皿，同时取一只不加样液的平皿作为空白对照。将电炉熔化的琼脂（A组）和微波炉熔化的琼脂（B组）冷却至45 oC左右时，加入各种添加成分后混匀，分别倾注平皿，待琼脂凝固后置培养箱中36 oC培养24 h-48 h，MYP平板置于30 oC。

1.5 结果记录在菌落计数器上分别计数各平皿上的菌落数，计算出每mL样液中的菌落数。菌落总数=两块平板的平均菌落数×稀释倍数×10，单位为CFU/mL。同时记录每种细菌在各种培养基上的菌落形态。

2 结果

2.1 将各菌株在营养琼脂上的菌落计数结果做比对，结果记录见表1。

按照GB4789.28-2013培养基质控要求中规定，待测培养基的生长率应不小于0.7 [2]。在本试验中，生长率应该为：B组的平板上菌落数/A组的平板上菌落数，本次试验结果显示，生长率最低的为0.81，均＞0.7，故可以认为微波炉熔化的琼脂在细菌的生长情况上与电炉熔化的琼脂相比，结果无明显差异。

2.2 将各菌株接种各种选择性平板主要是为了判定琼脂对于不同细菌的选择性如何，能不能有效抑制非目的菌。各菌株在两种熔化方式的琼脂上的形态特征，形态完全一致，见表2。

表1 各菌株在营养琼脂上的菌落计数结果琼脂类型大肠埃希氏菌沙门氏菌铜绿假单胞菌

金黄色葡萄球菌蜡样芽孢杆菌电炉熔化（A组） 5.6×109 1.9×108 4.2×108 1.2×109 4.6×107微波炉熔化（B组） 6.0×109 2.3×108 3.6×108 9.7×108 3.8×107生长率=B组菌落数/A组菌落数 1.07 1.21 0.86 0.81 0.83

表2 各菌株在不同熔化方式的琼脂上的形态特征琼脂类型大肠埃希氏菌沙门氏菌铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌蜡样芽孢杆菌营养琼脂圆形湿润、扁平、中等大小扁平、边缘不齐、蜡状HE琼脂橙色、圆形、湿润、有沉淀环圆形湿润、扁平、中等大小圆形湿润、扁平、中等大小、淡绿色圆形湿润、凸起、中等大小、淡黄色蓝绿色、中心黑色绿色、半透明、扁平、不易挑起无菌落生长无菌落生长B-P琼脂无菌落生长无菌落生长黑色、圆形、针尖大小黑色、边缘有浑浊带、周围有透明圈无菌落生长CN琼脂无菌落生长无菌落生长绿色、扁平、中等大小无菌落生长无菌落生长MYP琼脂无菌落生长无菌落生长无菌落生长圆形、凸起、黄色、培养基变黄扁平、边缘不齐、蜡状、菌落周围有沉淀环

由此可见，在选择性平板上目标菌生长良好，而一些菌株生长受抑制，说明该平板对目标菌的选择性分离效果良好，熔化过程未对琼脂成分造成影响。且经过计算，微波炉熔化的琼脂细菌生长率均＞0.7，与电炉熔化的琼脂相比，结果无明显差异。

3 讨论

通过以上实验结果可以看出，微波炉熔化琼脂与普通电炉对于培养基的效果并无区别。而微波炉加热熔化培养基具有以下优势。

3.1 从加热速度上微波加热原理是利用微波频率穿透材料，是材料内部加热，因此加热时间很短即能使培养基快速熔化。

3.2 从效率与节能上微波炉加热通过被加热物体直接吸收微波辐射而自身产生热量，实验室内空气和微波炉本身都不会发热，所以热效率极高。

3.3 从加热均匀度上微波炉加热时，培养基各部分受热均匀，均能接受微波内部产热，所以受热均匀。

3.4 从操作控制和安全性上电炉加热前期需要全功率加热，以便加速培养基熔化，但当培养基一旦熔化后，又需要立即减小功率或者关闭电炉，否则极易冲破塞子而飞溅溢出，造成人员烫伤、电炉短路等安全事故。而微波炉的加热惯性很小，只要断电即停止加热。

综上所述，在微生物培养基熔化过程中，微波炉不但具有和电炉同等的效果，而且还具有电炉所没有的一些优势，如加热快速，受热均匀，使用方便、安全，节能环保等优点，适宜在微生物实验室中推广使用。

参考文献

【相关文献】

[1]冯宝立.两种加热方式对培养基效果的影响[J].中国卫生检验杂志, 2011, 21(11): 2808-2810

[2]GB 4789.28-2013食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求[S].